革蘭氏染色液使用說(shuō)明書(shū)

【試劑盒組成】

1.      結晶紫染色液：5ml×1 支

2.     碘液：5ml×1 支

3.     脫色液：5ml×2 支

4.      沙黃復染液：5ml×1 支

【原理】

通過(guò)結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合 物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮 脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類(lèi)脂，故乙醇處理不會(huì )出現縫隙， 因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁 薄、外膜層類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類(lèi)脂為主的外膜迅 速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后 仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

【操作方法】

1.    準備好革蘭氏染色所需試劑、玻片、吸水紙、鑷子、接種環(huán)、廢液缸、洗瓶、去離 子水、酒精燈等，待檢測的菌株一般應為新鮮培養物；

2.    以酒精擦拭玻片，在酒精燈上干燥后，用接種環(huán)挑取一環(huán)滅菌的去離子水或生理鹽 水到載玻片上，挑取少量純培養物在水滴上涂抹至均勻分散，將涂片在酒精燈火焰 上滅活、固定；

3.    加結晶紫溶液 1-2 滴，染色 1 分鐘，用去離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗； 4.    待干，加革蘭氏碘液，作用 1 分鐘，用去離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗；

5.    加脫色液（95%酒精），不時(shí)搖動(dòng)玻片，直至無(wú)紫色脫落為止（約 10-20 秒），用去 離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗；

6.    待干，加復染液，復染 30 秒。用去離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗，待玻片干 燥后鏡檢；

7.    油鏡鏡檢。菌體呈紫色者為革蘭氏陽(yáng)性菌；呈紅色者為革蘭氏陰性菌。

【注意事項】

1.     培養物要新鮮，以免對結果的判斷造成影響；

2.     酒精洗脫為關(guān)鍵步驟，不可長(cháng)時(shí)間洗脫，以免對結果判斷造成影響； 3.     碘液容易揮發(fā)，平時(shí)應擰緊瓶蓋、避光保存；

4.     涂片可采用自然風(fēng)干、干燥箱等方法進(jìn)行干燥；

5.     每一步水洗時(shí)，注意不要直接對著(zhù)涂片沖洗，水流應從上方流經(jīng)涂片，輕輕水洗。

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